摘要：為提高羅非魚鏈球菌病發(fā)前的早期預(yù)警,根據(jù)海豚鏈球菌的16S rRNA基因的部分序列和無乳鏈球菌的Sip基因特異性序列,分別合成特異性檢測引物,經(jīng)過對反應(yīng)體系和反應(yīng)條件的優(yōu)化,建立檢測較低含量的無乳鏈球菌和海豚鏈球菌的分子技術(shù)。試驗(yàn)結(jié)果顯示,所建立的雙重PCR可擴(kuò)增出870 bp無乳鏈球菌和614 bp海豚鏈球菌的特異性片段,而遲鈍愛德華氏菌、維氏氣單胞菌、創(chuàng)傷弧菌、溫和氣單胞菌、溶藻弧菌、大腸桿菌均為陰性;無乳鏈球菌和海豚鏈球菌基因組DNA最低檢測量分別為9.84×10-5 ng/μL和9.30×10-5 ng/μL,菌液最低檢測量分別為2.76×103 cfu/mL和2.51×103 cfu/mL,遠(yuǎn)低于其半致死密度107 cfu/mL;對無乳鏈球菌和海豚鏈球菌混合感染的模擬臨床樣品的檢出率為100%。研究結(jié)果表明,該分子技術(shù)的特異性較強(qiáng)、靈敏度較高、檢出率較高,可用于較低含量的無乳鏈球菌和海豚鏈球菌的快速鑒別,為羅非魚鏈球菌的早期預(yù)警分子檢測提供技術(shù)支持。
